生物發光實驗

1.確定螢光素酶

常見的熒光素酶包括螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase，Fluc）、海洋蛋白質熒光素酶（Renilla luciferase，Rluc）和高司氏熒光素酶。它們在特定條件下都能催化各自的底物產生相應的光，而無需外部激發器。其中，Fluc是應用最為廣泛的熒光素酶。

推薦使用Goldbio的D-Luciferin做為螢火蟲熒光素酶的底物

2.構建穩轉螢光素酶細胞株

穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩轉株構建方法，具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。

3.驗證穩轉株

構建得到穩轉株后，可以進行體外實驗以驗證Fluc穩轉株效果。可以將生長良好的Fluc細胞消化，隨后用培養基稀釋成系列梯度濃度并分別接種于96孔板中，每孔100 μL，每個濃度設置三平行孔。

4.穩轉株注射動物

成功構建穩轉株后，即可進行動物移植模型構建。

5. 注射底物

注射的細胞一般會在2-3周成瘤（具體時間根據細胞種類，接種數量，細胞活力會有所不同），可以根據實驗設計進行一定處理。

6.活體成像

活體成像建議直接使用帶有麻醉裝置的小動物活體成像儀，這樣操作更方便，而且可以更準確的控制小鼠麻醉的情況。如儀器不帶麻醉裝置，也可自行麻醉小鼠后置于小動物活體成像儀中進行成像。檢測途中要注意防止小鼠中途蘇醒而離開成像臺。

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