原代細胞分離培養是一項實驗技術，它涉及從生物體中提取組織或細胞，并將它們轉移到體外環境中進行培養。這些來源包括各種組織器官、外周血和胚胎等。在培養過程中，原代細胞的生長速度相對較慢，通常在培養的10代內停止生長。因此，通常將培養的細胞歸類為原代細胞培養，這些細胞包括第1到第10代的細胞。下面讓我們一起來看看原代細胞分離的原理吧！

　　實驗原理：

　　原代細胞保持了體內原始細胞的生物學特性，接近于體內的生長特性。因此，它們為研究生物體細胞的生長、代謝和繁殖提供了有力的工具。此外，原代細胞培養還為精準醫療的腫瘤診治模式和個體化精準用藥提供了支持。

　　常見的原代細胞類型包括上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、黑色素細胞、神經元、星形膠質細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞和干細胞。

　　在原代細胞分離培養中，首先從動物體內取出各種組織，然后采用不同的方法，如酶消化（通常使用胰蛋白酶/膠原酶）、螯合劑（通常是EDTA）或機械分散，將組織分散成單個細胞。這些單細胞被放置在適當的培養基中進行培養，以在離體環境中存活、生長和繁殖。這個過程稱為原代培養，主要包括取材、分離和培養三個步驟。

　　以小鼠結腸細胞為例，為了提高目標細胞的純度，原代提取的細胞通常與其他細胞混合。通過采用生物酶梯度消化和差速貼壁等方法，可以獲得纖維組織和上皮組織的高純度目標細胞。具體地，使用膠原酶I和分散酶II消化結腸組織可分散細胞間質，而差異消化和差速貼壁方法則能有效去除成纖維細胞，最終獲得高度純凈的結腸上皮細胞。

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