Elabscience谷丙轉氨酶(ALT/GPT)活性熒光法測試盒適用于檢測動物組織樣本及血清(漿)等液體樣本中的谷丙轉氨酶活性。

谷丙轉氨酶(ALT)能夠催化丙氨酸和α-酮戊二酸發生轉氨基反應，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸在丙酮酸氧化酶的作用下生成H2O2，在過氧化物酶作用下，將無熒光探針氧化為有熒光的物質，通過測定體系熒光值的增加量，即可計算出 ALT的活性。

試劑準備

① 檢測前，所有試劑需平衡至室溫。

② 試劑三工作液的配制：

每支試劑三粉劑用1.2 mL試劑一充分溶解，置于冰盒上待用，可-20°C保存7天。

③ 1 mmol/L丙酮酸標準品儲備液的配制：

取10μL試劑五加入到990μL試劑一中，配制成1 mmol/L的丙酮酸標準品儲備液，臨用前現配現用。

④ 50μmol/L丙酮酸標準品溶液的配制：

按照1 mmol/L丙酮酸標準品儲配液：試劑一體積比為1：19的比例稀釋20倍，即得50μmol/L標準品溶液，按需配制，置于冰盒上待用。

⑤ 反應工作液的配制：

按試劑一：試劑二：試劑三工作液：試劑四體積比為56：4：20：20 的比例混勻，現用現配，避光保存，按需配制。

實驗關鍵點

① 試劑一取用時應倒出部分，再取用，避免試劑污染。

② 樣本加入板孔中時應觸底加入。

操作步驟

① 標準孔：向酶標板對應的標準孔中加入 20μL 的不同濃度標準品。

測定孔：向酶標板對應的測定孔中加入 20μL 的待測樣本。

② 向步驟①各孔中加入 100μL 的反應工作液。

③ 酶標儀上振板 5 s，室溫靜置 3 min，熒光酶標儀上設置激發光波長 535 nm，發射光波長 587 nm，測定各孔熒光值，記為 F1，然后于室溫下避光靜置反應 60 min，相同波長條件下測定各孔熒光值，記為 F2，則△F = F2 - F1。

注：標準孔不需要求差值，直接取反應 60 min 后測定的熒光值做標準曲線即可

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