一提到ELISA，各位做科研的小伙伴都很熟悉，不就是簡單的抗原抗體反應嘛？但這“簡單的免疫反應"，往往在實際操作中一個不小心，結果就會相差甚遠，甚至功虧一簣，假陽性或者假陰性會讓人焦頭爛額，那么，到底要怎樣快速有效的得到可靠的ELISA結果呢？

今天小編給大家帶來的是一家位于德國的專業生產免疫優化試劑的公司-——candor bioscience，它專注于ELISA各個環節中的試劑，為廣大研究者提供超過50種不同類型的產品，包括優化試劑，封閉試劑，穩定劑和免疫實驗緩沖液。通過使用這些試劑，可以幫助您提高實驗結果的可靠性，簡化實驗步驟，減少實驗時間。

接下來，小編將通過Sandwich-ELISA的實驗過程像大家展示candor bioscience優質ELISA產品在實驗中的應用。

第一步，抗體的包被：

用Coating Buffer 1x（貨號120/121）將抗體稀釋至0.1 - 10 µg/mL。在酶標板反應孔中加100-150 µL包被好的抗體，4℃孵育過夜或室溫孵育1-4 h。次日，棄去孔內溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145）洗板3 -5次，每次3 min。

第二步，封閉與穩定：

用表面封閉劑來充填空隙，從而排除ELISA后的步驟中干擾物質的再吸附。推薦使用的表面封閉劑如The Blocking Solution（貨號110），SmartBlock™（貨號113），BSA-Block（貨號115）。每個空中加入200 µl的表面封閉劑，室溫孵育1-2 h后，棄去孔內溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145）洗板3 -5次，每次3 min。

如果想保持ELISA板包被狀態的長期穩定，這個步驟就是必選的。可以選用Liquid Plate Sealer®（貨號160）進行ELISA板的穩定，向每個孔中加入200 µl的Liquid Plate Sealer®，室溫孵育15-90 min，棄去孔內溶液，在37-45 ℃條件下干燥1-2 h，這樣處理后的板子放在密封袋中，在干燥、2-8 ℃的環境中保存1-3 年的時間。

第三步，添加樣品或校準液(雙重測量)：

在孔中加入100-150 µL用樣品稀釋液稀釋后的樣品以及標準液，室溫孵育30 min，棄去孔內溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145）洗板3 -5次，每次3 min。

推薦使用candor bioscience優質buffer：

1. LowCross-Buffer®（貨號100），有助于減少交叉反應、基質效應和非特異性結合等干擾。將干擾降到zui低，提升了分析的質量與結果的可靠性。

2. Sample Buffer（貨號105），適合在無干擾的情況下使用。

3. Antibody Stabilizer（貨號130/131），可以在2-8°C下長期儲存蛋白質或抗體的穩定劑

第四步，加入標記抗體并檢測：

向每個孔中加入100-150 µl的標記抗體(HRP，辣根過氧化物酶;AP、堿性磷酸酶等)，室溫孵育2-4 h，棄去孔內溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145）洗板3 -5次，每次3 min，進行底物檢測(如過氧化物酶的TMB)。

推薦使用candor bioscience優質buffer：

1.HRP-Protector™（貨號222）, 用于在2-8℃長期保存HRP-結合物。

2. AP-Protector®（貨號235），用于2-8℃長期保存AP-結合物，還可直接用于AP偶聯物的培養。

3. LowCross® HRP-Stab（貨號270），用于在2-8℃長期保存HRP結合物，可以最大限度地減少非特異性結合、交叉反應和基質效應，中和干擾（包括 HAMA 的衍生干擾）。

4. LowCross-Buffer®（貨號100），有助于減少交叉反應、基質效應和非特異性結合等干擾。將干擾降到zui低，提升了分析的質量與結果的可靠性。

5. Sample Buffer（貨號105），適合在無干擾的情況下使用。

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